北方墨點法

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北方墨點法英语Northern blot)是分子生物學、生物化學中常用的實驗方法。利用探針偵測由凝膠電泳分離出來的RNA片段,尋找含有特定序列的RNA片段。與南方墨點法相似,RNA樣品經過凝膠電泳後會按照大小分離,然後將樣品從凝膠轉印到膜上,並用與目標序列互補的標記的探針來探測。實驗結果可以根據所用探針的不同以多種方式來觀察,但大多數都顯示的是樣品中被探測的RNA條帶的相對位置,也就是分子大小;而條帶的強度則與樣品中目標RNA的含量相關。這一方法可以測量目標RNA在不同樣品中的情況,因此已經被普遍用於研究特定基因在生物體中表現的時刻和表現量,也是這類研究中最基本的手段。

通过北方墨點法来检测RNA的流程图

發明者是史丹佛大學的James Alwine和喬治•斯塔克(George Stark)在1997年發明,其名字是源於第一種墨點技術,南方氏墨點法(命名者為Edwin Southern),兩者很相似,與南方氏墨點法主要的不同是北方墨點法探測的是RNA分子,而不是DNA分子。

原理[编辑]

與南方墨點法相似,膠體可以選用瓊脂凝膠或是聚丙烯醯胺凝膠,被檢測物是RNA,「探針」(probe)是與目標序列互補的RNA、DNA序列或是寡核苷酸,但是探針至少要有25個鹼基對與目標序列互補。

Capillary blotting system setup for the transfer of RNA from an electrophoresis gel to a blotting membrane.

膠體[编辑]

RNA樣品通常以含甲醛的瓊脂凝膠電泳來分離,甲醛作為RNA變性劑,將RNA的二級結構變性成一級結構。凝膠內用溴化乙錠(EtBr)染色,可在UV光下觀察到RNA樣品的品質、大小。

實驗步驟[编辑]

實驗大至分為鑄膠、跑膠、轉印、北方雜合反應等幾個部分。

參見[编辑]