双缩脲试剂

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双缩脲试剂与多肽形成的配合物。

双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,可延长试剂的使用寿命。

使用方法:先将双缩脲试剂A(氢氧化钾溶液)加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B(硫酸铜与酒石酸钾钠的混合溶液),振荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

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参考资料[编辑]