單鏈構象多態性

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單鏈構象多態性英语single-strand conformation polymorphism,简称为SSCP)是一種分離核酸的技術,可以分離相同長度但序列不同的核酸(性質類似於DGGETGGE,但方法不同)。

原理[编辑]

在非變性條件下,單鏈核酸分子由於分子内序列互補,可形成二級三級結構,即不同構象。在凝膠電泳中,未變性的單鏈核酸分子通過如下性質分離:

  • 鏈長
  • 分子閒相互作用
  • 一級結構:某些位點的一個核苷酸發生改變也可能影響整個構象。

實驗步驟[编辑]

  1. 利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。
  2. 利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈(其中一個PCR引物被磷酸化,這條鏈將被去除)。
  3. 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。

應用[编辑]

  • 單鏈構象多態性可用於預篩選克隆文庫
  • 可對其中的某一個條帶進行測序,並與數據庫中已知序列比對

參見[编辑]