放射免疫分析

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放射免疫分析所采用的竞争性免疫结合反应

放射免疫分析英语Radioimmunoassay缩写RIA),又称为放射免疫分析法放射免疫测定放射免疫测定法,简称放免放免法,是一种在无须采用生物测定方法的情况下,用于检测抗原(例如,血清之中激素的水平)的实验室测定方法。这一方法是由羅莎琳·薩斯曼·耶洛Solomon Aaron Berson1950年代创建的[1]。1977年,耶洛因建立胰岛素的RIA检测方法而获诺贝尔医学奖:在内分泌学领域,认当时为对此类微量激素的精确测定是一种突破。

基本原理[编辑]

RIA的基本原理为:放射性同位素标记的抗原(简称“标记抗原”)和非标记抗原(标准抗原或待测抗原)同时与数量有限的特异性抗体之间发生竞争性结合(抗原-抗体反应)。由于标记抗原与待测抗原的免疫活性完全相同,对特异性抗体具有同样的亲和力,当标记抗原和抗体为数量恒定时,待测抗原和标记抗原的总量大于抗体上的有效结合点时,标记抗原-抗体复合物的形成将随着待测抗原量的增加而减少,而非结合的或游离的标记抗原则随着待测抗原数量的增加而增加(也就是所谓的竞争结合反应),因此测定标记抗原-抗体或标记抗原即可推出待测抗原的数量。

抗原的放射性标记常常是利用发射γ射线的放射性同位素与酪氨酸结合来实现的。病人血清等标本之中所含的是未经放射性标记的抗原(亦可称为“冷”抗原),即待测抗原。总体上来说,特异性抗体之上抗原结合部位的数量是有限的。相对有限的抗原结合部位而言,标记抗原与待测抗原之间属于竞争关系。通过绘制结合曲线,即可计算出病人血清之中待测抗原的确切数量。

在采用这种方法的时候,结合抗原与非结合抗原之间的分离至关重要。最初,为了沉淀离心抗原-抗体反应所形成的免疫复合物,分离方法采用的是针对第一抗体的第二抗体。后来,在对T3T4进行RIA测定时,哥伦比亚大学的Werner和Acebedo对RIA方法进行了扩展,采用活性炭悬浊液进行沉淀[2]。1975年,Acebedo和Hayek等人在BBRC之上发表了人TSH的超微量RIA法[3]

优缺点[编辑]

RIA技术极其敏感而又极其特异,但其却需要具备尖端复杂的设备,且成本也不低。同时,RIA还需要特殊的预防措施,因为其要用到放射性物质。因此,如今RIA在很大程度上已经被ELISA所取代。就ELISA而言,抗原-抗体反应的测定采用的是颜色变化信号,而不是放射性信号。


参考文献[编辑]

  1. ^ Yalow RS, Berson SA. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man. J Clin Invest 1960;39:1157-75. PMID 13846364.
  2. ^ Werner SC, Acebedo G, Radichevich I. Rapid radioimmunoassay for both T4 and T3 in the same sample of human serum. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1974, 38 (3): 493–5. PMID 4815178. 
  3. ^ Acebedo G, Hayek A, Klegerman M, Crolla L, Bermes E, Brooks M. A rapid ultramicro radioimmunoassay for human thyrotropin. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975, 65 (2): 449–56. doi:10.1016/S0006-291X(75)80168-9. PMID 1148002. 

参见[编辑]


外部链接[编辑]