限制性片段長度多態性

维基百科,自由的百科全书
跳转至: 导航搜索


分子生物學中,限制性片段長度多態性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)具有兩種涵義:一是DNA分子由於核苷酸序列的不同而產生的一種可以用來相互區別的性質;二是一種實驗技術,利用這種性質來比較不同的DNA分子。這種技術可以用於遺傳指紋親子鑑定[1]

方法[编辑]

通常,一個獨立樣本的DNA首先被提取和純化。純化後的DNA可以用PCR反應擴增。隨後,用限制性核酸内切酶切成“限制性片段”,每種内切酶只能切除可被它識別的特定序列。隨後,限制性片段通過瓊脂糖凝膠電泳將不同長度的片段分開。得到的凝胶可以通過南方墨點法(Southern blotting)进行强化。

RFLP是第一种被用于作图研究的DNA标记,它们一般有如下特征:1.出于染色体上的位置相对固定;2.同一亲本及其子代相同微点上的多态性片段特征不变;3.同一凝胶电泳可显示不同多态性片段,具有共显性特点。

結果[编辑]

每個個體的酶切位點之間的距離會有差距,這樣限制性片段的長度有區別,不同個體的某個條帶的位置也會不同(也就是“多態性”)。這樣就能從遺傳水平上區分不同個體。RFLP也可以揭示不同個體之間的遺傳關係,因爲孩子從父母處繼承了染色體。這種技術也可以用來判斷各個的生物之間的關係。

T-RFLP[编辑]

T爲terminal縮寫,即端點限制性片段長度多態性。如在16S rRNA分析中,利用一個或一對熒光標記的引物進行PCR擴增。隨後用高頻率的内切酶進行酶切。通過毛細管電泳將切開的片段分離,可檢測端部的限制性片段長度。這是快速鑒別菌株或者簡單群落的方法。

參見[编辑]

参考[编辑]

  1. ^ Saiki, RK; Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Erlich HA, Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985年Dec 20月, 230 (4732): 1350–1354. doi:10.1126/science.2999980. PMID 2999980.