DNA提取

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DNA提取是從細胞等樣本中取得DNA的常規方法。

DNA提取概述[编辑]

DNA提取分爲三個基本步驟,每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及後續步驟的不同而有區別。

  1. 利用研磨或者超聲破碎細胞,並通過加入去污劑以除掉膜脂
  2. 加入蛋白酶醋酸鹽沉澱,或者氯仿抽提,以除掉細胞内的蛋白,如與DNA結合的組蛋白
  3. 將DNA在冷乙醇異丙醇中沉澱,因爲DNA在醇中不可溶而黏在一起,這一步也能除掉鹽分。

另外,目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業化試劑盒

DNA的檢測[编辑]

二苯胺(DPA)指示劑能夠證明DNA的存在。在酸中加熱後,含有脫氧糖的DNA水解,2-脫氧核糖轉變為ω-羥基菊芋糖醛(ω-hydroxylevulinyl aldehyde),與二苯胺反應,產生藍色的化合物。DNA濃度可以利用分光光度計通過測量溶液在600nm的吸光度來計算。

測量DNA純度的方法是測量DNA溶液在260和280nm的吸光度。DNA吸收260nm處的紫外光,而蛋白質吸收280nm處的。一個較純的DNA樣品應該基本不含蛋白質,因此260/280的吸光度比值應該較高。

DNA也可以通過内切核酸酶切開後跑膠,與已知濃度的DNA分子量標準(marker或者ladder)對照來測定濃度。

DNA的使用[编辑]

提取得到的基因組DNA包含細胞核和線粒體DNA(真核生物)以及葉綠體DNA(植物藻類)。這些DNA可用於法醫學鑑定、診斷和系統發育研究,以及用於進一步的聚合酶鏈式反應(PCR)以獲得DNA中的特殊信息。

純化得到的DNA也可用於研究DNA結構和化學性質,檢驗DNA-蛋白質相互作用,進行南方墨點法雜交,克隆測序

參見[编辑]