克列诺片段

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Klenow片段(左)与DNA聚合酶I(右)的功能结构域(PDB)

克列诺片段(Klenow fragment)或称克列诺酶(Klenow enzyme),是汉斯·克列诺1970年用枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时,得到的两个片段中分子量较大的一个,它含有605个氨基酸残基(324~928),并有大小两个结构域,其中大结构域(518~928)具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切酶活性,小结构域(324~517)则具有5'→3'外切酶活性。[1]

exo-Klenow片段[编辑]

在一些應用中,Klenow片段的3'→5' 核酸外切酶活性可能會干擾合成進行。於是可透過修改大腸桿菌Pol A基因(D355A,E357A)使其N端324個鹼基移除並失去3'→5' 核酸外切酶活性而保留5'→3'聚合酶活性,這種形式的酶稱為exo-Klenow片段[2]。 exo-Klenow片段用於微陣列的一些螢光標記反應,也可用於序列末端加上dA和dT,這是將DNA銜接子(Adapter)連接到DNA片段的過程中的重要步驟,經常用於製備用於次世代定序(NGS)的DNA文庫

  1. ^ Joyce, Catherine M.; Grindley, Nigel D. F.; Ng, Kimmie; Astatke, Mekbib. A single side chain prevents Escherichia coli DNA polymerase I (Klenow fragment) from incorporating ribonucleotides. Proceedings of the National Academy of Sciences. 1998-03-31, 95 (7): 3402–3407. ISSN 0027-8424. PMID 9520378. doi:10.1073/pnas.95.7.3402 (英语). 
  2. ^ Mildvan, A. S.; Loeb, L. A.; Ferrin, L. J.; Serpersu, E. H.; Mullen, G. P. Metal binding to DNA polymerase I, its large fragment, and two 3',5'-exonuclease mutants of the large fragment.. Journal of Biological Chemistry. 1990-08-25, 265 (24): 14327–14334. ISSN 0021-9258. PMID 2201684 (英语).