放射免疫分析

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放射免疫分析所採用的競爭性免疫結合反應

放射免疫分析英文RadioimmunoassayRIA),又稱為放射免疫分析法放射免疫測定放射免疫測定法,簡稱放免放免法,是一種在無須採用生物測定方法的情況下用於檢測抗原(例如,血清之中激素的水平)的實驗室測定方法。這一方法是由羅莎琳·薩斯曼·耶洛Solomon Aaron Berson於二十世紀50年代創建的[1]。1977年,耶洛因為建立胰島素的RIA檢測方法而獲得諾貝爾醫學獎:在內分泌學領域,當時認為對於此類微量激素的精確測定乃是一種突破。

基本原理[編輯]

RIA的基本原理為:放射性同位素標記的抗原(簡稱「標記抗原」)和非標記抗原(標準抗原或待測抗原)同時與數量有限的特異性抗體之間發生競爭性結合(抗原-抗體反應)。由於標記抗原與待測抗原的免疫活性完全相同,對特異性抗體具有同樣的親和力,當標記抗原和抗體為數量恆定時,待測抗原和標記抗原的總量大於抗體上的有效結合點時,標記抗原-抗體複合物的形成將隨著待測抗原量的增加而減少,而非結合的或游離的標記抗原則隨著待測抗原數量的增加而增加(也就是所謂的競爭結合反應),因此測定標記抗原-抗體或標記抗原即可推出待測抗原的數量。

抗原的放射性標記常常是利用發射γ射線的放射性同位素與酪氨酸結合來實現的。病人血清等標本之中所含的是未經放射性標記的抗原(亦可稱為「冷」抗原),即待測抗原。總體上來說,特異性抗體之上抗原結合部位的數量是有限的。相對有限的抗原結合部位而言,標記抗原與待測抗原之間屬於競爭關係。通過繪製結合曲線,即可計算出病人血清之中待測抗原的確切數量。

在採用這種方法的時候,結合抗原與非結合抗原之間的分離至關重要。最初,為了沉澱離心抗原-抗體反應所形成的免疫複合物,分離方法採用的是針對第一抗體的第二抗體。後來,在對T3T4進行RIA測定時,哥倫比亞大學的Werner和Acebedo對RIA方法進行了擴展,採用活性炭懸濁液進行沉澱[2]。1975年,Acebedo和Hayek等人在BBRC之上發表了人TSH的超微量RIA法[3]

優缺點[編輯]

RIA技術極其敏感而又極其特異,但其卻需要具備尖端複雜的設備,且成本也不低。同時,RIA還需要特殊的預防措施,因為其要用到放射性物質。因此,如今RIA在很大程度上已經被ELISA所取代。就ELISA而言,抗原-抗體反應的測定採用的是顏色變化信號,而不是放射性信號。


參考文獻[編輯]

  1. ^ Yalow RS, Berson SA. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man. J Clin Invest 1960;39:1157-75. PMID 13846364.
  2. ^ Werner SC, Acebedo G, Radichevich I. Rapid radioimmunoassay for both T4 and T3 in the same sample of human serum. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1974, 38 (3): 493–5. PMID 4815178. 
  3. ^ Acebedo G, Hayek A, Klegerman M, Crolla L, Bermes E, Brooks M. A rapid ultramicro radioimmunoassay for human thyrotropin. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975, 65 (2): 449–56. doi:10.1016/S0006-291X(75)80168-9. PMID 1148002. 

參見[編輯]


外部連結[編輯]