北方墨點法
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北方墨點法(英語:Northern blot),又稱 RNA 墨點法,是分子生物學、生物化學中常用的實驗方法,通過探測樣品中的RNA(或隔離的mRNA)來研究基因表現。[1][2]
利用探針偵測由凝膠電泳分離出來的RNA片段,尋找含有特定序列的RNA片段。與南方墨點法相似,RNA樣品經過凝膠電泳後會按照大小分離,然後將樣品從凝膠轉印到膜上,並用與目標序列互補的標記的探針來探測。實驗結果可以根據所用探針的不同,以多種方式來觀察,但大多數都顯示的是樣品中被探測的RNA條帶的相對位置,也就是分子大小;而條帶的強度則與樣品中目標RNA的含量相關。這一方法可以測量目標RNA在不同樣品中的情況,因此已經被普遍用於研究特定基因在生物體中表現的時刻和表現量,也是這類研究中最基本的手段。
發明者是史丹佛大學的James Alwine和喬治·斯塔克(George Stark)在1977年發明,其名字是源於第一種墨點技術,南方墨點法(命名者為Edwin Southern)[1],兩者很相似,與南方墨點法主要的不同是北方墨點法探測的是RNA分子,而不是DNA分子。[3]
原理
[編輯]與南方墨點法相似,膠體可以選用瓊脂凝膠或是聚丙烯醯胺凝膠,被檢測物是RNA,「探針」(probe)是與目標序列互補的RNA、DNA序列或是寡核苷酸,但是探針至少要有25個鹼基對與目標序列互補。
![](http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/1/1e/Capillary_blot_setup.svg/220px-Capillary_blot_setup.svg.png)
膠體
[編輯]RNA樣品通常以含甲醛的瓊脂凝膠電泳來分離,甲醛作為RNA變性劑,將RNA的二級結構變性成一級結構。凝膠內用溴化乙錠(EtBr)染色,可在UV光下觀察到RNA樣品的品質、大小。
實驗步驟
[編輯]實驗大至分為鑄膠、跑膠、轉漬、北方雜合反應等幾個部分。
參見
[編輯]參考文獻
[編輯]- ^ 1.0 1.1 Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J. Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell, 5th ed. Garland Science, Taylor & Francis Group, NY, pp 538–539.
- ^ Kevil, C. G., Walsh, L., Laroux, F. S., Kalogeris, T., Grisham, M. B., Alexander, J. S. (1997) An Improved, Rapid Northern Protocol. Biochem. and Biophys. Research Comm. 238:277–279.
- ^ Bor, Y.C.; Swartz, J.; Li, Y.; Coyle, J.; Rekosh, D.; Hammarskjold, Marie-Louise. Northern Blot analysis of mRNA from mammalian polyribosomes. Nature Protocols. 2006. doi:10.1038/nprot.2006.216.
外部連結
[編輯]關於北方墨點法 的圖書館資源 |
- (英文)OpenWetWare(頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)