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腺相关病毒：修订间差异

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==历史==
==历史==
腺相关病毒最初被认为是[[腺病毒]]制备过程中混入的污染物之一。20世纪60年代，[[匹兹堡大学]]的鲍勃·艾奇逊（{{lang|en|Bob Atchison}}）与美国[[国立卫生研究院]]的{{le|华莱士·罗|Wallace P. Rowe}}（{{lang|en|Wallace P. Rowe}}）实验室的工作最初确定腺相关病毒是一种[[依赖性细小病毒属|依赖性细小病毒]]。后来的血清学研究表明，腺相关病毒不能造成任何已知的人类疾病，且只能在[[腺病毒]]、疱疹病毒等[[辅助病毒]]存在的前提下才能感染人类<ref>{{cite journal |vauthors= Carter BJ |title= Adeno-associated virus and the development of adeno-associated virus vectors: a historical perspective |journal= Molecular Therapy |volume= 10 |issue=6 |pages= 981–9 |date= December 2004 |pmid= 15564130 |doi= 10.1016/j.ymthe.2004.09.011 |doi-access= free }}</ref>。
腺相关病毒最初被认为是[[腺病毒]]制备过程中混入的污染物之一。20世纪60年代，[[匹兹堡大学]]的鲍勃·艾奇逊（{{lang|en|Bob Atchison}}）与美国[[國家衛生院 (美國)|国立卫生研究院]]的{{le|华莱士·罗|Wallace P. Rowe}}（{{lang|en|Wallace P. Rowe}}）实验室的工作最初确定腺相关病毒是一种[[依赖性细小病毒属|依赖性细小病毒]]。后来的血清学研究表明，腺相关病毒不能造成任何已知的人类疾病，且只能在[[腺病毒]]、疱疹病毒等[[辅助病毒]]存在的前提下才能感染人类<ref>{{cite journal |vauthors= Carter BJ |title= Adeno-associated virus and the development of adeno-associated virus vectors: a historical perspective |journal= Molecular Therapy |volume= 10 |issue=6 |pages= 981–9 |year=2004 |pmid= 15564130 |doi= 10.1016/j.ymthe.2004.09.011 |doi-access= free }}</ref>。


==生命周期==
==複製周期==
[[File:AAVs by electron microscopy.jpg|thumb|兩個腺病毒顆粒周圍被許多腺相关病毒顆粒環繞]]
虽然存在腺相关病毒能够在没有辅助病毒存在的前提下完成裂解细胞的过程，但绝大部分情况下，腺相关病毒需要辅助病毒的存在才能完成完整的生命周期<ref>{{cite web |url= https://ehs.research.uiowa.edu/adeno-associated-virus-and-adeno-associated-viral-vectors |title= Adeno-Associated Virus and Adeno-associated Viral Vectors |access-date= 2018-09-19 |archive-url= https://web.archive.org/web/20180920045917/https://ehs.research.uiowa.edu/adeno-associated-virus-and-adeno-associated-viral-vectors |archive-date= 2018-09-20 |dead-url= yes }}</ref>。腺相关病毒在感染细胞后，需要辅助病毒的帮助（例如，腺相关病毒的辅助病毒疱疹病毒能为其提供[[DNA聚合酶]]和[[解旋酶]]以及一些对腺相关病毒[[转录]]的早期启动必要的蛋白）才能进入{{le|溶原循环|Lysogenic cycle|裂解期}}，进行病毒复制。在没有辅助病毒的前提下，腺相关病毒基因的表达将会受限，一部分腺相关病毒DNA会在这种情况下插入至人[[19号染色体]]q13.4区域，即AAVS1位点<ref name="DayaBerns2008">{{cite journal|last1=Daya|first1=Shyam|last2=Berns|first2=Kenneth I.|title=Gene Therapy Using Adeno-Associated Virus Vectors|journal=Clinical Microbiology Reviews|volume=21|issue=4|year=2008|pages=583–593|issn=0893-8512|doi=10.1128/CMR.00008-08}}</ref>。
虽然存在腺相关病毒能够在没有辅助病毒存在的前提下完成裂解细胞的过程，但绝大部分情况下，腺相关病毒需要辅助病毒的存在才能完成完整的生命周期<ref>{{cite web |url= https://ehs.research.uiowa.edu/adeno-associated-virus-and-adeno-associated-viral-vectors |title= Adeno-Associated Virus and Adeno-associated Viral Vectors |access-date= 2018-09-19 |archive-url= https://web.archive.org/web/20180920045917/https://ehs.research.uiowa.edu/adeno-associated-virus-and-adeno-associated-viral-vectors |archive-date= 2018-09-20 |dead-url= yes }}</ref>。腺相关病毒在感染细胞后，需要辅助病毒的帮助（例如，腺相关病毒的辅助病毒疱疹病毒能为其提供[[DNA聚合酶]]和[[解旋酶]]以及一些对腺相关病毒[[转录]]的早期启动必要的蛋白）才能进入{{le|溶原循环|Lysogenic cycle|裂解期}}，进行病毒复制。在没有辅助病毒的前提下，腺相关病毒基因的表达将会受限，一部分腺相关病毒DNA会在这种情况下插入至人[[19号染色体]]q13.4区域，即AAVS1位点<ref name="DayaBerns2008">{{cite journal|last1=Daya|first1=Shyam|last2=Berns|first2=Kenneth I.|title=Gene Therapy Using Adeno-Associated Virus Vectors|journal=Clinical Microbiology Reviews|volume=21|issue=4|year=2008|pages=583–593|issn=0893-8512|doi=10.1128/CMR.00008-08}}</ref>。


==基因组==
==基因组==
[[File:Adeno-associated_viruses-genome.jpg|thumb|腺相关病毒的基因组示意图：腺相关病毒基因组的两端是一对[[反向重复序列]]（ITR），中间存在两个[[开放读框]]（ORF）''rep''与''cap'']]
[[File:Adeno-associated_viruses-genome.jpg|thumb|腺相关病毒的基因组示意图：腺相关病毒基因组的两端是一对[[反向重复序列]]（ITR），中间存在两个[[开放读框]]（ORF）''rep''与''cap'']]
腺相关病毒的基因组由一条长约4.8[[碱基对|千碱基对]]（kb）的单链DNA构成，有的情况下这条DNA是正义链，有的情况下这条DNA则是反义链。腺相关病毒基因组两端是一对长145碱基对（bp）、序列对称的[[反向重复序列]]（ITR）。这对反向重复序列对腺相关病毒的复制<ref name="BohenzkyLefebvreBerns1988">{{cite journal |vauthors= Bohenzky RA, LeFebvre RB, Berns KI |title= Sequence and symmetry requirements within the internal palindromic sequences of the adeno-associated virus terminal repeat |journal= Virology |volume= 166 |issue=2 |pages=316–27 |date= October 1988 |pmid= 2845646 |doi= 10.1016/0042-6822(88)90502-8 }}</ref>、衣壳化<ref name="ZhouMuzyczka1998">{{cite journal |vauthors= Zhou X, Muzyczka N |title= In vitro packaging of adeno-associated virus DNA |journal= Journal of Virology |volume= 72 |issue=4 |pages= 3241–7 |date= April 1998 |pmid= 9525651 |pmc= 109794 |doi= 10.1128/JVI.72.4.3241-3247.1998 }}</ref>、以及插入宿主[[染色体]]的过程有重要作用<ref name="WangPonnazhagan1995">{{cite journal |vauthors= Wang XS, Ponnazhagan S, Srivastava A |title= Rescue and replication signals of the adeno-associated virus 2 genome |journal= Journal of Molecular Biology |volume= 250 |issue=5 |pages= 573–80 |date= July 1995 |pmid = 7623375 |doi= 10.1006/jmbi.1995.0398 }}</ref><ref name="WeitzmanKyostio1994">{{cite journal |vauthors= Weitzman MD, Kyöstiö SR, Kotin RM, Owens RA |title= Adeno-associated virus (AAV) Rep proteins mediate complex formation between AAV DNA and its integration site in human DNA |journal= Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 91 |issue=13 |pages = 5808–12 |date= June 1994 |pmid= 8016070 |pmc= 44086 |doi= 10.1073/pnas.91.13.5808 |bibcode= 1994PNAS...91.5808W }}</ref>。腺相关病毒基因组的中间部分含有两个开放读框''rep''与''cap''。其中，''rep''读框上同时存在''p5''、''p19''，以及''p40''三种[[启动子]]序列。''p5''与''p19''启动子与''rep''读框编码的Rep蛋白转录相关，分别控制Rep蛋白的两种转录本表达。这两种Rep蛋白的转录本各含有一个[[内含子]]，根据转录本的类型以及内含子的剪切与否，Rep蛋白存在四种变体：Rep78、Rep68、Rep52，以及Rep40（Rep后面的数字代表这种蛋白的分子量为多少[[千道尔顿]]）。而''p40''启动子则控制''cap''读框编码VP1、VP2，以及VP3三种蛋白的表达。VP1、VP2，以及VP3蛋白的[[重叠基因|编码区域存在部分重叠]]<ref name="JayLaughlin1981">{{cite journal |vauthors= Jay FT, Laughlin CA, Carter BJ |title= Eukaryotic translational control: adeno-associated virus protein synthesis is affected by a mutation in the adenovirus DNA-binding protein |journal = Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 78 |issue=5 |pages= 2927–31 |date= May 1981 |pmid= 6265925 |pmc= 319472 |doi= 10.1073/pnas.78.5.2927 |bibcode= 1981PNAS...78.2927J }}</ref>。此外，一种腺相关病毒的非结构蛋白AAP编码域也位于''cap''读框中<ref>{{cite journal |vauthors= Sonntag F, Köther K, Schmidt K, Weghofer M, Raupp C, Nieto K, Kuck A, Gerlach B, Böttcher B, Müller OJ, Lux K, Hörer M, Kleinschmidt JA |title= The assembly-activating protein promotes capsid assembly of different adeno-associated virus serotypes |journal= Journal of Virology |volume= 85 |issue= 23 |pages= 12686–97 |date= December 2011 |pmid= 21917944 |pmc= 3209379 |doi= 10.1128/JVI.05359-11 }}</ref>。
腺相关病毒的基因组由一条长约4.8[[碱基对|千碱基对]]（kb）的正义或反义单链DNA构成，其两端是序列对称的[[反向重复序列]]（ITR），对腺相关病毒的复制<ref name="BohenzkyLefebvreBerns1988">{{cite journal |vauthors= Bohenzky RA, LeFebvre RB, Berns KI |title= Sequence and symmetry requirements within the internal palindromic sequences of the adeno-associated virus terminal repeat |journal= Virology |volume= 166 |issue=2 |pages=316–27 |date= October 1988 |pmid= 2845646 |doi= 10.1016/0042-6822(88)90502-8 }}</ref>、衣壳化<ref name="ZhouMuzyczka1998">{{cite journal |vauthors= Zhou X, Muzyczka N |title= In vitro packaging of adeno-associated virus DNA |journal= Journal of Virology |volume= 72 |issue=4 |pages= 3241–7 |date= April 1998 |pmid= 9525651 |pmc= 109794 |doi= 10.1128/JVI.72.4.3241-3247.1998 }}</ref>、以及插入宿主[[染色体]]的过程有重要作用<ref name="WangPonnazhagan1995">{{cite journal |vauthors= Wang XS, Ponnazhagan S, Srivastava A |title= Rescue and replication signals of the adeno-associated virus 2 genome |journal= Journal of Molecular Biology |volume= 250 |issue=5 |pages= 573–80 |date= July 1995 |pmid = 7623375 |doi= 10.1006/jmbi.1995.0398 }}</ref><ref name="WeitzmanKyostio1994">{{cite journal |vauthors= Weitzman MD, Kyöstiö SR, Kotin RM, Owens RA |title= Adeno-associated virus (AAV) Rep proteins mediate complex formation between AAV DNA and its integration site in human DNA |journal= Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 91 |issue=13 |pages = 5808–12 |date= June 1994 |pmid= 8016070 |pmc= 44086 |doi= 10.1073/pnas.91.13.5808 |bibcode= 1994PNAS...91.5808W }}</ref>
，中間則有''rep''與''cap''兩個开放读框，前者包括四個序列[[重疊基因|相互重疊]]的基因，編碼Rep78、Rep68、Rep52與Rep40等四種參與病毒基因複製的蛋白；後者包括三個序列重疊的基因，編碼VP1、VP2與VP3等三種組成病毒衣殼的蛋白<ref name="Carter2000">{{Cite book |vauthors= Carter BJ |year=2000 |veditors= Lassic DD, Templeton NS |isbn= 978-0-585-39515-9 |chapter= Adeno-associated virus and adeno-associated virus vectors for gene delivery |title= Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies |publisher= Marcel Dekker, Inc. |place= New York City |pages= 41–59 }}</ref>。腺相关病毒本身不編碼[[DNA聚合酶]]，僅仰賴宿主細胞的DNA聚合酶合成自己的基因組<ref name="pmid15877812">{{cite journal| author=Gonçalves MA| title=Adeno-associated virus: from defective virus to effective vector. | journal=Virol J | year= 2005 | volume= 2 | issue= | pages= 43 | pmid=15877812 | doi=10.1186/1743-422X-2-43 | pmc=1131931 | url=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/eutils/elink.fcgi?dbfrom=pubmed&tool=sumsearch.org/cite&retmode=ref&cmd=prlinks&id=15877812 }} </ref>。

===反向重复序列===
腺相关病毒基因組兩端的反向重复序列（ITR）序列对称，长145碱基对（bp），可各自形成一[[莖環]]結構，使病毒利用其[[方向性 (分子生物學)|3'端]]開始DNA複製，無需由[[引物酶]]合成[[引物]]即可複製自身的DNA<ref name="pmid15877812"/>，形成相互連結的雙股DNA中間產物，再以{{le|缺口酶|Nicking enzyme}}將兩股DNA切開<ref name="pmid15877812"/>。除DNA複製外，反向重複序列也參與病毒插入宿主DNA的過程<ref name="WangPonnazhagan1995">{{cite journal |vauthors= Wang XS, Ponnazhagan S, Srivastava A |title= Rescue and replication signals of the adeno-associated virus 2 genome |journal= Journal of Molecular Biology |volume= 250 |issue=5 |pages= 573–80 |date= July 1995 |pmid = 7623375 |doi= 10.1006/jmbi.1995.0398 }}</ref><ref name="WeitzmanKyostio1994">{{cite journal |vauthors= Weitzman MD, Kyöstiö SR, Kotin RM, Owens RA |title= Adeno-associated virus (AAV) Rep proteins mediate complex formation between AAV DNA and its integration site in human DNA |journal= Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 91 |issue=13 |pages = 5808–12 |date= June 1994 |pmid= 8016070 |pmc= 44086 |doi= 10.1073/pnas.91.13.5808 |bibcode= 1994PNAS...91.5808W }}</ref>，且為病毒顆粒正常組裝所需<ref name="ZhouMuzyczka1998">{{cite journal |vauthors= Zhou X, Muzyczka N |title= In vitro packaging of adeno-associated virus DNA |journal= Journal of Virology |volume= 72 |issue=4 |pages= 3241–7 |date= April 1998 |pmid= 9525651 |pmc= 109794 |doi= 10.1128/JVI.72.4.3241-3247.1998 }}</ref>。

===''rep''基因===
腺相关病毒基因组中上游的''rep''读框可由左側的''p5''或''p19''兩個[[启动子]]開始[[轉錄]]，產生長度不一的两种RNA，这两种RNA中皆含有一个[[内含子]]，可能在轉錄後被切除，依使用啟動子的不同與內含子被切除與否，''rep''基因可轉錄出四種mRNA，進而產生四種蛋白質变体：Rep78、Rep68、Rep52，以及Rep40（Rep后面的数字代表这种蛋白的分子量为多少[[千道尔顿]]）<ref name="KyostioOwens1994">{{cite journal |vauthors = Kyöstiö SR, Owens RA, Weitzman MD, Antoni BA, Chejanovsky N, Carter BJ |title= Analysis of adeno-associated virus (AAV) wild-type and mutant Rep proteins for their abilities to negatively regulate AAV p5 and p19 mRNA levels |journal= Journal of Virology |volume= 68 |issue=5 |pages= 2947–57 |date= May 1994 |pmid= 8151765 |pmc= 236783 |doi= 10.1128/JVI.68.5.2947-2957.1994 }}</ref>，前兩者是由''p5''啟動子轉錄產生，可與反向重複序列形成的莖環結合，參與病毒DNA的複製，後兩者則是由''p19''啟動子轉錄產生<ref name="pmid21844368">{{cite journal| author=Sitaraman V, Hearing P, Ward CB, Gnatenko DV, Wimmer E, Mueller S | display-authors=etal| title=Computationally designed adeno-associated virus (AAV) Rep 78 is efficiently maintained within an adenovirus vector. | journal=Proc Natl Acad Sci U S A | year= 2011 | volume= 108 | issue= 34 | pages= 14294-9 | pmid=21844368 | doi=10.1073/pnas.1102883108 | pmc=3161519 | url=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/eutils/elink.fcgi?dbfrom=pubmed&tool=sumsearch.org/cite&retmode=ref&cmd=prlinks&id=21844368 }} </ref>。四種Rep蛋白皆可與[[三磷酸腺苷|ATP]]結合，且皆具[[解旋酶]]活性，它們可抑制自身的啟動子（p5和p19轉錄），並可活化轉錄''cap''基因蛋白的p40啟動子<ref name="KyostioOwens1994"/><ref name="ImMuzyczka1990">{{cite journal |vauthors = Im DS, Muzyczka N |title= The AAV origin binding protein Rep68 is an ATP-dependent site-specific endonuclease with DNA helicase activity |journal= Cell |volume= 61 |issue=3 |pages= 447–57 |date= May 1990 |pmid= 2159383 |doi= 10.1016/0092-8674(90)90526-K |s2cid= 27997617 }}</ref><ref name="ImMuzyczka1992">{{cite journal |vauthors= Im DS, Muzyczka N |title= Partial purification of adeno-associated virus Rep78, Rep52, and Rep40 and their biochemical characterization |journal= Journal of Virology |volume= 66 |issue=2 |pages= 1119–28 |date= February 1992 |pmid= 1309894 |pmc= 240816 |doi= 10.1128/JVI.66.2.1119-1128.1992 }}</ref><ref name="Samulski2003">{{cite book |vauthors= Samulski RJ |title= Human Gene Therapy: Current Opportunities and Future Trends |chapter= AAV vectors, the future workhorse of human gene therapy |journal= Ernst Schering Research Foundation Workshop |issue= 43 |pages= 25–40 |year= 2003 |pmid= 12894449 |doi= 10.1007/978-3-662-05352-2_3 |isbn= 978-3-662-05354-6 }}</ref><ref name="TrempeCarter1988a">{{cite journal |vauthors= Trempe JP, Carter BJ |title= Regulation of adeno-associated virus gene expression in 293 cells: control of mRNA abundance and translation |journal= Journal of Virology |volume= 62 |issue=1 |pages= 68–74 |date=January 1988 |pmid= 2824856 |pmc= 250502 |doi= 10.1128/JVI.62.1.68-74.1988 }}</ref>。

===''cap''基因===
''cap''基因位於''rep''基因的下游，''p40''启动子可調控其轉錄，產生序列重疊VP1、VP2、VP3與AAP（組裝活化蛋白）四種蛋白，VP1、VP2與VP3的大小分別為87、72與62千道尔顿<ref name="JayLaughlin1981">{{cite journal |vauthors= Jay FT, Laughlin CA, Carter BJ |title= Eukaryotic translational control: adeno-associated virus protein synthesis is affected by a mutation in the adenovirus DNA-binding protein |journal = Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 78 |issue=5 |pages= 2927–31 |date= May 1981 |pmid= 6265925 |pmc= 319472 |doi= 10.1073/pnas.78.5.2927 |bibcode= 1981PNAS...78.2927J }}</ref>，可以1:1:10的比例組成腺相关病毒[[二十面體]]的衣殼<ref name="FSonntag2010">{{cite journal |vauthors= Sonntag F, Schmidt K, Kleinschmidt JA |title= A viral assembly factor promotes AAV2 capsid formation in the nucleolus |journal= Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 107 |issue= 22 |pages= 10220–5 |date= June 2010 |pmid= 20479244 |pmc= 2890453 |doi= 10.1073/pnas.1001673107 |bibcode= 2010PNAS..10710220S }}</ref>，AAP亦為衣殼組裝所需的蛋白<ref>{{cite journal |vauthors= Sonntag F, Köther K, Schmidt K, Weghofer M, Raupp C, Nieto K, Kuck A, Gerlach B, Böttcher B, Müller OJ, Lux K, Hörer M, Kleinschmidt JA |title= The assembly-activating protein promotes capsid assembly of different adeno-associated virus serotypes |journal= Journal of Virology |volume= 85 |issue= 23 |pages= 12686–97 |date= December 2011 |pmid= 21917944 |pmc= 3209379 |doi= 10.1128/JVI.05359-11 }}</ref>。''cap''基因轉錄出的RNA可能將一段較長的內含子或一段較短的內含子切除，分別形成長2.3kb或長2.6kb的mRNA，其中長內含子被切除的情況較為常見，因此2.3kb的mRNA為大宗，可轉譯產生VP3蛋白，但其[[起始密碼子]]（AUG）上游有一個ACG密碼子周邊亦形成可起始轉譯的[[Kozak序列]]，少數[[核糖體]]會自此開始轉譯，產生比VP3蛋白多出一[[N端]]延伸區域的VP2蛋白；而切除短內含子的2.6kb的mRNA則會轉譯產生VP1蛋白，也比VP3多了一N端延伸區<ref name="BecerraRose1985">{{cite journal |vauthors = Becerra SP, Rose JA, Hardy M, Baroudy BM, Anderson CW |title= Direct mapping of adeno-associated virus capsid proteins B and C: a possible ACG initiation codon |journal= Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America |volume= 82 |issue= 23 |pages= 7919–23 |date= December 1985 |pmid= 2999784 |pmc= 390881 |doi= 10.1073/pnas.82.23.7919 |bibcode= 1985PNAS...82.7919B }}</ref><ref name="CassinottiWeitz1988">{{cite journal |vauthors= Cassinotti P, Weitz M, Tratschin JD |title = Organization of the adeno-associated virus (AAV) capsid gene: mapping of a minor spliced mRNA coding for virus capsid protein 1 |journal= Virology |volume= 167 |issue=1 |pages= 176–84 |date= November 1988 |pmid= 2847413 |doi= 10.1016/0042-6822(88)90067-0 }}</ref><ref name="MuralidharBecerra1994">{{cite journal |vauthors= Muralidhar S, Becerra SP, Rose JA |title= Site-directed mutagenesis of adeno-associated virus type 2 structural protein initiation codons: effects on regulation of synthesis and biological activity |journal= Journal of Virology |volume= 68 |issue=1 |pages= 170–6 |date= January 1994 |pmid= 8254726 |pmc= 236275 |doi= 10.1128/JVI.68.1.170-176.1994 }}</ref><ref name="TrempeCarter1988b">{{cite journal |vauthors = Trempe JP, Carter BJ |title= Alternate mRNA splicing is required for synthesis of adeno-associated virus VP1 capsid protein |journal= Journal of Virology |volume= 62 |issue=9 |pages= 3356–63 |date= September 1988 |pmid= 2841488 |pmc= 253458 |doi= 10.1128/JVI.62.9.3356-3363.1988 }}</ref>。

由於2.3mRNA的數量較多，且其上游ACG密碼子啟動轉譯的能力比正常的起始密碼子弱，三種衣殼蛋白中VP3被轉譯生成的量遠多於VP1與VP2，與其在衣殼中的組成比例相符<ref name=RabinowitzSamulski2000>{{cite journal |vauthors= Rabinowitz JE, Samulski RJ |title= Building a better vector: the manipulation of AAV virions |journal= Virology |volume= 278 |issue=2 |pages= 301–8 |date= December 2000 |pmid= 11118354 |doi= 10.1006/viro.2000.0707 |doi-access= free }}</ref>。有研究顯示VP1蛋白的N端延伸區有[[磷脂酶]]A2活性，可能有助於病毒自細胞釋出<ref name="GirodWobus2002">{{cite journal |vauthors= Girod A, Wobus CE, Zádori Z, Ried M, Leike K, Tijssen P, Kleinschmidt JA, Hallek M |title = The VP1 capsid protein of adeno-associated virus type 2 is carrying a phospholipase A2 domain required for virus infectivity |journal= The Journal of General Virology |volume= 83 |issue= Pt 5 |pages= 973–8 |date= May 2002 |pmid= 11961250 |doi= 10.1099/0022-1317-83-5-973 |doi-access= free }}</ref>，因而為病毒複製週期所需，相較之下VP2可能並非病毒組裝必須的蛋白<ref name="WarringtonGorbatyuk1994">{{cite journal |vauthors= Warrington KH, Gorbatyuk OS, Harrison JK, Opie SR, Zolotukhin S, Muzyczka N |title= Adeno-associated virus type 2 VP2 capsid protein is nonessential and can tolerate large peptide insertions at its N terminus |journal= Journal of Virology |volume= 78 |issue= 12 |pages= 6595–609 |date= June 2004 |pmid= 15163751 |pmc= 416546 |doi= 10.1128/JVI.78.12.6595-6609.2004 }}</ref>。


==用于基因治疗的潜力==
==用于基因治疗的潜力==
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腺相关病毒作为基因治疗载体存在一些缺点。首先是容量低，最多只能容纳4.5kb的插入片段，无法容纳''{{link-en|肌营养不良蛋白|Dystrophin|DMD}}''等较长的人类基因<ref name="WorgallCrystal2020"/>。其次，输入的腺相关病毒载体可能被体内存在的针对天然腺相关病毒的[[抗体]]中和。此外，腺相关病毒也存在整合入宿主基因组的情况<ref name="ShamsSilva2020">{{cite journal|last1=Shams|first1=Shahin|last2=Silva|first2=Eduardo A.|title=Bioengineering strategies for gene delivery|year=2020|pages=107–148|doi=10.1016/B978-0-12-816221-7.00004-5}}</ref>。
腺相关病毒作为基因治疗载体存在一些缺点。首先是容量低，最多只能容纳4.5kb的插入片段，无法容纳''{{link-en|肌营养不良蛋白|Dystrophin|DMD}}''等较长的人类基因<ref name="WorgallCrystal2020"/>。其次，输入的腺相关病毒载体可能被体内存在的针对天然腺相关病毒的[[抗体]]中和。此外，腺相关病毒也存在整合入宿主基因组的情况<ref name="ShamsSilva2020">{{cite journal|last1=Shams|first1=Shahin|last2=Silva|first2=Eduardo A.|title=Bioengineering strategies for gene delivery|year=2020|pages=107–148|doi=10.1016/B978-0-12-816221-7.00004-5}}</ref>。

過去認為將腺相关病毒用於基因治療時，反向重复序列是病毒基因組中唯一需與轉入的基因[[顺式作用元件|順式]]（''in cis''）組裝的元件，''cap''與''rep''蛋白皆可[[反式作用因子|反式]]（''in trans''）導入，但有新研究結果顯示''rep''基因編碼區域中有一稱為順式rep依賴型元件（cis-acting Rep-dependent element，簡稱CARE）的序列與轉入的基因順式組裝時也可促進病毒的複製與組裝<ref name="NonyTessier2001">{{cite journal |vauthors= Nony P, Tessier J, Chadeuf G, Ward P, Giraud A, Dugast M, Linden RM, Moullier P, Salvetti A |title= Novel cis-acting replication element in the adeno-associated virus type 2 genome is involved in amplification of integrated rep-cap sequences |journal= Journal of Virology |volume= 75 |issue=20 |pages= 9991–4 |date= October 2001 |pmid= 11559833 |pmc= 114572 |doi= 10.1128/JVI.75.20.9991-9994.2001 }}</ref><ref name="NonyChadeuf2003">{{cite journal |vauthors= Nony P, Chadeuf G, Tessier J, Moullier P, Salvetti A |title= Evidence for packaging of rep-cap sequences into adeno-associated virus (AAV) type 2 capsids in the absence of inverted terminal repeats: a model for generation of rep-positive AAV particles |journal= Journal of Virology |volume= 77 |issue=1 |pages= 776–81 |date= January 2003 |pmid= 12477885 |pmc= 140600 |doi= 10.1128/JVI.77.1.776-781.2003 }}</ref><ref name="PhilpottGiraud2002">{{cite journal |vauthors= Philpott NJ, Giraud-Wali C, Dupuis C, Gomos J, Hamilton H, Berns KI, Falck-Pedersen E |title= Efficient integration of recombinant adeno-associated virus DNA vectors requires a p5-rep sequence in cis |journal= Journal of Virology |volume= 76 |issue= 11 |pages= 5411–21 |date= June 2002 |pmid= 11991970 |pmc= 137060 |doi= 10.1128/JVI.76.11.5411-5421.2002 }}</ref><ref name="TullisShenk2000">{{cite journal |vauthors= Tullis GE, Shenk T |title = Efficient replication of adeno-associated virus type 2 vectors: a cis-acting element outside of the terminal repeats and a minimal size |journal= Journal of Virology |volume= 74 |issue= 24 |pages= 11511–21 |date= December 2000 |pmid= 11090148 |pmc= 112431 |doi= 10.1128/JVI.74.24.11511-11521.2000 }}</ref>。


根据2019年的数据，全球范围内共有超过250件使用腺相关病毒载体技术的临床试验，占基于病毒载体的基因治疗临床试验总数的8.3%<ref>{{cite web |title=Vectors used in Gene Therapy Clinical Trials |date=December 2019 |work=Journal of Gene Medicine |publisher=Wiley |url=http://www.abedia.com/wiley/vectors.php |access-date=2012-01-04 |archive-date=2019-10-21 |archive-url=https://web.archive.org/web/20191021212715/http://www.abedia.com/wiley/vectors.php |dead-url=yes }}</ref>。
根据2019年的数据，全球范围内共有超过250件使用腺相关病毒载体技术的临床试验，占基于病毒载体的基因治疗临床试验总数的8.3%<ref>{{cite web |title=Vectors used in Gene Therapy Clinical Trials |date=December 2019 |work=Journal of Gene Medicine |publisher=Wiley |url=http://www.abedia.com/wiley/vectors.php |access-date=2012-01-04 |archive-date=2019-10-21 |archive-url=https://web.archive.org/web/20191021212715/http://www.abedia.com/wiley/vectors.php |dead-url=yes }}</ref>。
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==参考文献==
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2021年7月9日 (五) 23:58的版本

腺相关病毒
一种用作人基因治疗载体的腺相关病毒1LP3的3D原子结构
病毒分類 编辑
（未分级）： 病毒 Virus
域： 單鏈DNA病毒域 Monodnaviria
界： 称德病毒界 Shotokuvirae
门： 科薩特病毒門 Cossaviricota
纲： 第五病毒綱 Quintoviricetes
目： 小病毒目 Piccovirales
科： 细小病毒科 Parvoviridae
属： 依赖性细小病毒属 Dependoparvovirus
种：
腺相关病毒 Adeno-associated virus
种类
  • 腺相关病毒A
    （Adeno-associated dependoparvovirus A）
  • 腺相关病毒B
    （Adeno-associated dependoparvovirus B）

腺相关病毒（Adeno-associated viruses，常缩写为AAV），是一种隶属细小病毒科依赖性细小病毒属、能够感染人类以及其他部分灵长类动物的病毒。腺相关病毒直径约20纳米、无被膜，无法自主完成复制（英语：Replication-defective virus），全基因组长约4.8千碱基对（kb）[1][2]。

目前，尚无已知的疾病与腺相关病毒有关。腺相关病毒一般只能引发轻度的免疫反应。加之腺相关病毒无法自主完成复制等原因，使研究者认为腺相关病毒适合用于改造用作人基因治疗的载体，以及体外等基因人类疾病模型（英语：Isogenic human disease models）的构建[3]。由腺病毒改造而成的基因治疗载体能够同时感染分裂中和分裂不活跃的细胞，并将载体DNA以一种不整合入染色体的方式导入到细胞中（不过在自然条件下，也有腺相关病毒携带的DNA在感染后插入染色体的报导）[4]。目前，一部分使用腺相关病毒的基因治疗临床试验取得了正面的结果[5]。

历史

腺相关病毒最初被认为是腺病毒制备过程中混入的污染物之一。20世纪60年代，匹兹堡大学的鲍勃·艾奇逊（Bob Atchison）与美国国立卫生研究院的华莱士·罗（英语：Wallace P. Rowe）（Wallace P. Rowe）实验室的工作最初确定腺相关病毒是一种依赖性细小病毒。后来的血清学研究表明，腺相关病毒不能造成任何已知的人类疾病，且只能在腺病毒、疱疹病毒等辅助病毒存在的前提下才能感染人类[6]。

複製周期

兩個腺病毒顆粒周圍被許多腺相关病毒顆粒環繞

虽然存在腺相关病毒能够在没有辅助病毒存在的前提下完成裂解细胞的过程，但绝大部分情况下，腺相关病毒需要辅助病毒的存在才能完成完整的生命周期[7]。腺相关病毒在感染细胞后，需要辅助病毒的帮助（例如，腺相关病毒的辅助病毒疱疹病毒能为其提供DNA聚合酶和解旋酶以及一些对腺相关病毒转录的早期启动必要的蛋白）才能进入裂解期（英语：Lysogenic cycle），进行病毒复制。在没有辅助病毒的前提下，腺相关病毒基因的表达将会受限，一部分腺相关病毒DNA会在这种情况下插入至人19号染色体q13.4区域，即AAVS1位点[8]。

基因组

腺相关病毒的基因组示意图：腺相关病毒基因组的两端是一对反向重复序列（ITR），中间存在两个开放读框（ORF）rep与cap

腺相关病毒的基因组由一条长约4.8千碱基对（kb）的正义或反义单链DNA构成，其两端是序列对称的反向重复序列（ITR），对腺相关病毒的复制[9]、衣壳化[10]、以及插入宿主染色体的过程有重要作用[11][12] ，中間則有rep與cap兩個开放读框，前者包括四個序列相互重疊的基因，編碼Rep78、Rep68、Rep52與Rep40等四種參與病毒基因複製的蛋白；後者包括三個序列重疊的基因，編碼VP1、VP2與VP3等三種組成病毒衣殼的蛋白[13]。腺相关病毒本身不編碼DNA聚合酶，僅仰賴宿主細胞的DNA聚合酶合成自己的基因組[14]。

反向重复序列

腺相关病毒基因組兩端的反向重复序列（ITR）序列对称，长145碱基对（bp），可各自形成一莖環結構，使病毒利用其3'端開始DNA複製，無需由引物酶合成引物即可複製自身的DNA[14]，形成相互連結的雙股DNA中間產物，再以缺口酶（英语：Nicking enzyme）將兩股DNA切開[14]。除DNA複製外，反向重複序列也參與病毒插入宿主DNA的過程[11][12]，且為病毒顆粒正常組裝所需[10]。

rep基因

腺相关病毒基因组中上游的rep读框可由左側的p5或p19兩個启动子開始轉錄，產生長度不一的两种RNA，这两种RNA中皆含有一个内含子，可能在轉錄後被切除，依使用啟動子的不同與內含子被切除與否，rep基因可轉錄出四種mRNA，進而產生四種蛋白質变体：Rep78、Rep68、Rep52，以及Rep40（Rep后面的数字代表这种蛋白的分子量为多少千道尔顿）[15]，前兩者是由p5啟動子轉錄產生，可與反向重複序列形成的莖環結合，參與病毒DNA的複製，後兩者則是由p19啟動子轉錄產生[16]。四種Rep蛋白皆可與ATP結合，且皆具解旋酶活性，它們可抑制自身的啟動子（p5和p19轉錄），並可活化轉錄cap基因蛋白的p40啟動子[15][17][18][19][20]。

cap基因

cap基因位於rep基因的下游，p40启动子可調控其轉錄，產生序列重疊VP1、VP2、VP3與AAP（組裝活化蛋白）四種蛋白，VP1、VP2與VP3的大小分別為87、72與62千道尔顿[21]，可以1:1:10的比例組成腺相关病毒二十面體的衣殼[22]，AAP亦為衣殼組裝所需的蛋白[23]。cap基因轉錄出的RNA可能將一段較長的內含子或一段較短的內含子切除，分別形成長2.3kb或長2.6kb的mRNA，其中長內含子被切除的情況較為常見，因此2.3kb的mRNA為大宗，可轉譯產生VP3蛋白，但其起始密碼子（AUG）上游有一個ACG密碼子周邊亦形成可起始轉譯的Kozak序列，少數核糖體會自此開始轉譯，產生比VP3蛋白多出一N端延伸區域的VP2蛋白；而切除短內含子的2.6kb的mRNA則會轉譯產生VP1蛋白，也比VP3多了一N端延伸區[24][25][26][27]。

由於2.3mRNA的數量較多，且其上游ACG密碼子啟動轉譯的能力比正常的起始密碼子弱，三種衣殼蛋白中VP3被轉譯生成的量遠多於VP1與VP2，與其在衣殼中的組成比例相符[28]。有研究顯示VP1蛋白的N端延伸區有磷脂酶A2活性，可能有助於病毒自細胞釋出[29]，因而為病毒複製週期所需，相較之下VP2可能並非病毒組裝必須的蛋白[30]。

用于基因治疗的潜力

腺相关病毒因毒性低、不能自主复制、不致病，且较少整合到宿主基因组中，因而被认为是一种较为理想的基因治疗载体。将腺相关病毒改造为基因治疗载体的具体操作方法是腺相关病毒基因组上的rep与cap区域替换为目的基因[3][31]。腺相关病毒载体导入人体后，不分裂的细胞能够一直保持输入的目的基因片段，而持续分裂细胞则会逐渐随细胞分裂丢失经由腺相关病毒导入的基因片段，因此腺相关病毒疗法不太适合以持续分裂的细胞（如干细胞）作为靶标[31]。

腺相关病毒作为基因治疗载体存在一些缺点。首先是容量低，最多只能容纳4.5kb的插入片段，无法容纳DMD（英语：Dystrophin）等较长的人类基因[31]。其次，输入的腺相关病毒载体可能被体内存在的针对天然腺相关病毒的抗体中和。此外，腺相关病毒也存在整合入宿主基因组的情况[32]。

過去認為將腺相关病毒用於基因治療時，反向重复序列是病毒基因組中唯一需與轉入的基因順式（in cis）組裝的元件，cap與rep蛋白皆可反式（in trans）導入，但有新研究結果顯示rep基因編碼區域中有一稱為順式rep依賴型元件（cis-acting Rep-dependent element，簡稱CARE）的序列與轉入的基因順式組裝時也可促進病毒的複製與組裝[33][34][35][36]。

根据2019年的数据，全球范围内共有超过250件使用腺相关病毒载体技术的临床试验，占基于病毒载体的基因治疗临床试验总数的8.3%[37]。

参见

参考文献

  1. ^ Naso, Michael F.; Tomkowicz, Brian; Perry, William L.; Strohl, William R. Adeno-Associated Virus (AAV) as a Vector for Gene Therapy. BioDrugs. 2017, 31 (4): 317–334. ISSN 1173-8804. doi:10.1007/s40259-017-0234-5. 
  2. ^ Wu, Zhijian; Yang, Hongyan; Colosi, Peter. Effect of Genome Size on AAV Vector Packaging. Molecular Therapy. 2010, 18 (1): 80–86. ISSN 1525-0016. doi:10.1038/mt.2009.255. 
  3. ^ 3.0 3.1 Grieger JC, Samulski RJ. Adeno-associated Virus as a Gene Therapy Vector: Vector Development, Production and Clinical Applications. Adeno-associated virus as a gene therapy vector: vector development, production and clinical applications. Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology 99. 2005: 119–45. ISBN 978-3-540-28404-8. PMID 16568890. doi:10.1007/10_005. 
  4. ^ Deyle DR, Russell DW. Adeno-associated virus vector integration. Current Opinion in Molecular Therapeutics. August 2009, 11 (4): 442–7. PMC 2929125 可免费查阅. PMID 19649989. 
  5. ^ Maguire AM, Simonelli F, Pierce EA, Pugh EN, Mingozzi F, Bennicelli J, et al. Safety and efficacy of gene transfer for Leber's congenital amaurosis. The New England Journal of Medicine. May 2008, 358 (21): 2240–8. PMC 2829748 可免费查阅. PMID 18441370. doi:10.1056/NEJMoa0802315. 
  6. ^ Carter BJ. Adeno-associated virus and the development of adeno-associated virus vectors: a historical perspective. Molecular Therapy. 2004, 10 (6): 981–9. PMID 15564130. doi:10.1016/j.ymthe.2004.09.011 可免费查阅. 
  7. ^ Adeno-Associated Virus and Adeno-associated Viral Vectors. [2018-09-19]. （原始内容存档于2018-09-20）. 
  8. ^ Daya, Shyam; Berns, Kenneth I. Gene Therapy Using Adeno-Associated Virus Vectors. Clinical Microbiology Reviews. 2008, 21 (4): 583–593. ISSN 0893-8512. doi:10.1128/CMR.00008-08. 
  9. ^ Bohenzky RA, LeFebvre RB, Berns KI. Sequence and symmetry requirements within the internal palindromic sequences of the adeno-associated virus terminal repeat. Virology. October 1988, 166 (2): 316–27. PMID 2845646. doi:10.1016/0042-6822(88)90502-8. 
  10. ^ 10.0 10.1 Zhou X, Muzyczka N. In vitro packaging of adeno-associated virus DNA. Journal of Virology. April 1998, 72 (4): 3241–7. PMC 109794 可免费查阅. PMID 9525651. doi:10.1128/JVI.72.4.3241-3247.1998. 
  11. ^ 11.0 11.1 Wang XS, Ponnazhagan S, Srivastava A. Rescue and replication signals of the adeno-associated virus 2 genome. Journal of Molecular Biology. July 1995, 250 (5): 573–80. PMID 7623375. doi:10.1006/jmbi.1995.0398. 
  12. ^ 12.0 12.1 Weitzman MD, Kyöstiö SR, Kotin RM, Owens RA. Adeno-associated virus (AAV) Rep proteins mediate complex formation between AAV DNA and its integration site in human DNA. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. June 1994, 91 (13): 5808–12. Bibcode:1994PNAS...91.5808W. PMC 44086 可免费查阅. PMID 8016070. doi:10.1073/pnas.91.13.5808. 
  13. ^ Carter BJ. Adeno-associated virus and adeno-associated virus vectors for gene delivery. Lassic DD, Templeton NS (编). Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies. New York City: Marcel Dekker, Inc. 2000: 41–59. ISBN 978-0-585-39515-9. 
  14. ^ 14.0 14.1 14.2 Gonçalves MA. Adeno-associated virus: from defective virus to effective vector.. Virol J. 2005, 2: 43. PMC 1131931 可免费查阅. PMID 15877812. doi:10.1186/1743-422X-2-43. 
  15. ^ 15.0 15.1 Kyöstiö SR, Owens RA, Weitzman MD, Antoni BA, Chejanovsky N, Carter BJ. Analysis of adeno-associated virus (AAV) wild-type and mutant Rep proteins for their abilities to negatively regulate AAV p5 and p19 mRNA levels. Journal of Virology. May 1994, 68 (5): 2947–57. PMC 236783 可免费查阅. PMID 8151765. doi:10.1128/JVI.68.5.2947-2957.1994. 
  16. ^ Sitaraman V, Hearing P, Ward CB, Gnatenko DV, Wimmer E, Mueller S; et al. Computationally designed adeno-associated virus (AAV) Rep 78 is efficiently maintained within an adenovirus vector.. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011, 108 (34): 14294–9. PMC 3161519 可免费查阅. PMID 21844368. doi:10.1073/pnas.1102883108. 
  17. ^ Im DS, Muzyczka N. The AAV origin binding protein Rep68 is an ATP-dependent site-specific endonuclease with DNA helicase activity. Cell. May 1990, 61 (3): 447–57. PMID 2159383. S2CID 27997617. doi:10.1016/0092-8674(90)90526-K. 
  18. ^ Im DS, Muzyczka N. Partial purification of adeno-associated virus Rep78, Rep52, and Rep40 and their biochemical characterization. Journal of Virology. February 1992, 66 (2): 1119–28. PMC 240816 可免费查阅. PMID 1309894. doi:10.1128/JVI.66.2.1119-1128.1992. 
  19. ^ Samulski RJ. AAV vectors, the future workhorse of human gene therapy. Human Gene Therapy: Current Opportunities and Future Trends. 2003: 25–40. ISBN 978-3-662-05354-6. PMID 12894449. doi:10.1007/978-3-662-05352-2_3.  |journal=被忽略 (帮助); |issue=被忽略 (帮助)
  20. ^ Trempe JP, Carter BJ. Regulation of adeno-associated virus gene expression in 293 cells: control of mRNA abundance and translation. Journal of Virology. January 1988, 62 (1): 68–74. PMC 250502 可免费查阅. PMID 2824856. doi:10.1128/JVI.62.1.68-74.1988. 
  21. ^ Jay FT, Laughlin CA, Carter BJ. Eukaryotic translational control: adeno-associated virus protein synthesis is affected by a mutation in the adenovirus DNA-binding protein. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. May 1981, 78 (5): 2927–31. Bibcode:1981PNAS...78.2927J. PMC 319472 可免费查阅. PMID 6265925. doi:10.1073/pnas.78.5.2927. 
  22. ^ Sonntag F, Schmidt K, Kleinschmidt JA. A viral assembly factor promotes AAV2 capsid formation in the nucleolus. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. June 2010, 107 (22): 10220–5. Bibcode:2010PNAS..10710220S. PMC 2890453 可免费查阅. PMID 20479244. doi:10.1073/pnas.1001673107. 
  23. ^ Sonntag F, Köther K, Schmidt K, Weghofer M, Raupp C, Nieto K, Kuck A, Gerlach B, Böttcher B, Müller OJ, Lux K, Hörer M, Kleinschmidt JA. The assembly-activating protein promotes capsid assembly of different adeno-associated virus serotypes. Journal of Virology. December 2011, 85 (23): 12686–97. PMC 3209379 可免费查阅. PMID 21917944. doi:10.1128/JVI.05359-11. 
  24. ^ Becerra SP, Rose JA, Hardy M, Baroudy BM, Anderson CW. Direct mapping of adeno-associated virus capsid proteins B and C: a possible ACG initiation codon. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. December 1985, 82 (23): 7919–23. Bibcode:1985PNAS...82.7919B. PMC 390881 可免费查阅. PMID 2999784. doi:10.1073/pnas.82.23.7919. 
  25. ^ Cassinotti P, Weitz M, Tratschin JD. Organization of the adeno-associated virus (AAV) capsid gene: mapping of a minor spliced mRNA coding for virus capsid protein 1. Virology. November 1988, 167 (1): 176–84. PMID 2847413. doi:10.1016/0042-6822(88)90067-0. 
  26. ^ Muralidhar S, Becerra SP, Rose JA. Site-directed mutagenesis of adeno-associated virus type 2 structural protein initiation codons: effects on regulation of synthesis and biological activity. Journal of Virology. January 1994, 68 (1): 170–6. PMC 236275 可免费查阅. PMID 8254726. doi:10.1128/JVI.68.1.170-176.1994. 
  27. ^ Trempe JP, Carter BJ. Alternate mRNA splicing is required for synthesis of adeno-associated virus VP1 capsid protein. Journal of Virology. September 1988, 62 (9): 3356–63. PMC 253458 可免费查阅. PMID 2841488. doi:10.1128/JVI.62.9.3356-3363.1988. 
  28. ^ Rabinowitz JE, Samulski RJ. Building a better vector: the manipulation of AAV virions. Virology. December 2000, 278 (2): 301–8. PMID 11118354. doi:10.1006/viro.2000.0707 可免费查阅. 
  29. ^ Girod A, Wobus CE, Zádori Z, Ried M, Leike K, Tijssen P, Kleinschmidt JA, Hallek M. The VP1 capsid protein of adeno-associated virus type 2 is carrying a phospholipase A2 domain required for virus infectivity. The Journal of General Virology. May 2002, 83 (Pt 5): 973–8. PMID 11961250. doi:10.1099/0022-1317-83-5-973 可免费查阅. 
  30. ^ Warrington KH, Gorbatyuk OS, Harrison JK, Opie SR, Zolotukhin S, Muzyczka N. Adeno-associated virus type 2 VP2 capsid protein is nonessential and can tolerate large peptide insertions at its N terminus. Journal of Virology. June 2004, 78 (12): 6595–609. PMC 416546 可免费查阅. PMID 15163751. doi:10.1128/JVI.78.12.6595-6609.2004. 
  31. ^ 31.0 31.1 31.2 Worgall, Stefan; Crystal, Ronald G. Gene therapy: 493–518. 2020. doi:10.1016/B978-0-12-818422-6.00029-0. 
  32. ^ Shams, Shahin; Silva, Eduardo A. Bioengineering strategies for gene delivery: 107–148. 2020. doi:10.1016/B978-0-12-816221-7.00004-5. 
  33. ^ Nony P, Tessier J, Chadeuf G, Ward P, Giraud A, Dugast M, Linden RM, Moullier P, Salvetti A. Novel cis-acting replication element in the adeno-associated virus type 2 genome is involved in amplification of integrated rep-cap sequences. Journal of Virology. October 2001, 75 (20): 9991–4. PMC 114572 可免费查阅. PMID 11559833. doi:10.1128/JVI.75.20.9991-9994.2001. 
  34. ^ Nony P, Chadeuf G, Tessier J, Moullier P, Salvetti A. Evidence for packaging of rep-cap sequences into adeno-associated virus (AAV) type 2 capsids in the absence of inverted terminal repeats: a model for generation of rep-positive AAV particles. Journal of Virology. January 2003, 77 (1): 776–81. PMC 140600 可免费查阅. PMID 12477885. doi:10.1128/JVI.77.1.776-781.2003. 
  35. ^ Philpott NJ, Giraud-Wali C, Dupuis C, Gomos J, Hamilton H, Berns KI, Falck-Pedersen E. Efficient integration of recombinant adeno-associated virus DNA vectors requires a p5-rep sequence in cis. Journal of Virology. June 2002, 76 (11): 5411–21. PMC 137060 可免费查阅. PMID 11991970. doi:10.1128/JVI.76.11.5411-5421.2002. 
  36. ^ Tullis GE, Shenk T. Efficient replication of adeno-associated virus type 2 vectors: a cis-acting element outside of the terminal repeats and a minimal size. Journal of Virology. December 2000, 74 (24): 11511–21. PMC 112431 可免费查阅. PMID 11090148. doi:10.1128/JVI.74.24.11511-11521.2000. 
  37. ^ Vectors used in Gene Therapy Clinical Trials. Journal of Gene Medicine. Wiley. December 2019 [2012-01-04]. （原始内容存档于2019-10-21）. 
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