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随机引子标记

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随机引子标记英文Random-Primed Labeling)是种分子生物学技术,可用于在DNA探针上加上可作为讯号识别的标记[1]

步骤

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先将欲标记探针片段加热,使其变性双股分离成单股,接着加入随机引子并降温使其和单股黏合(通常是hexonucleotides)。 再以Klenow片段将接有标记分子的dNTP如Digoxigenin(地高辛)、Biotin(生物素)或萤光分子如Cyanine用来合出互补股,就可得到掺有标记物的探针。

侦测

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Digoxigenin之后可用Anti Digoxigenin(一级抗体)接合再以标有萤光酵素(HRP或AP)的Anti Digoxigenin Antibody(二级抗体)接合一级抗体, 并加入萤光酵素受质即可发出萤光,再以冷光仪或分光光度计吸光值

而Biotin可与接有萤光酵素的Streptavidin结合,并如同上面加入萤光酵素受质测吸光值。

参考资料

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  1. ^ Smith, D. R. Random primed labeling of DNA. Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 1993, 18: 445–447 [2019-02-11]. ISSN 1940-6029. PMID 21390693. doi:10.1385/0-89603-245-0:445. (原始内容存档于2019-02-12).