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DNA提取

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DNA提取是从细胞等样本中取得DNA的常规方法。

DNA提取概述

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DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

  1. 利用研磨或者超声波破碎细胞得到沉淀,或者氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白
  2. 将DNA在冷乙醇异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
  3. 测定样品的DNA浓度并分析DNA纯度页面存档备份,存于互联网档案馆),使用二苯胺试剂进行定性鉴定。

另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒

DNA的检测

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二苯胺(DPA)指示剂能够证明DNA的存在。在酸中加热后,含有脱氧糖的DNA水解,2-脱氧核糖转变为ω-羟基菊芋糖醛(ω-hydroxylevulinyl aldehyde),与二苯胺反应,产生蓝色的化合物。DNA浓度可以利用分光光度计通过测量溶液在600nm的吸光度来计算。

测量DNA纯度的方法是测量DNA溶液在260和280nm的吸光度。DNA吸收260nm处的紫外光,而蛋白质吸收280nm处的。一个较纯的DNA样品应该基本不含蛋白质,因此260/280的吸光度比值应该较高。

DNA也可以通过限制性核酸内切酶切开后跑胶,与已知浓度的DNA分子量标准(marker或者ladder)对照来测定浓度。

DNA的使用

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提取得到的基因组DNA包含细胞核和线粒体DNA(真核生物)以及叶绿体DNA(植物藻类)。这些DNA可用于法医学鉴定、诊断和系统发育研究,以及用于进一步的聚合酶链式反应(PCR)以获得DNA中的特殊信息。

纯化得到的DNA也可用于研究DNA结构和化学性质,检验DNA-蛋白质相互作用,进行南方墨点法杂交,复制测序

参见

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