克列诺片段
克列诺片段（Klenow fragment）或称克列诺酶（Klenow enzyme），是汉斯·克列诺1970年用枯草杆菌蛋白酶（subtilisin）处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时，得到的两个片段中分子量较大的一个，它含有605个氨基酸残基（324～928），并有大小两个结构域，其中大结构域（518～928）具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切酶活性，小结构域（324～517）则具有5'→3'外切酶活性。[1]
exo-Klenow片段
[编辑]在一些应用中，Klenow片段的3'→5' 核酸外切酶活性可能会干扰合成进行。于是可透过修改大肠杆菌Pol A基因(D355A，E357A)使其N端324个碱基移除并失去3'→5' 核酸外切酶活性而保留5'→3'聚合酶活性，这种形式的酶称为exo-Klenow片段[2]。 exo-Klenow片段用于微阵列的一些萤光标记反应，也可用于序列末端加上dA和dT，这是将DNA衔接子(Adapter)连接到DNA片段的过程中的重要步骤，经常用于制备用于次世代定序(NGS)的DNA文库。
参考资料
[编辑]- ^ Joyce, Catherine M.; Grindley, Nigel D. F.; Ng, Kimmie; Astatke, Mekbib. A single side chain prevents Escherichia coli DNA polymerase I (Klenow fragment) from incorporating ribonucleotides. Proceedings of the National Academy of Sciences. 1998-03-31, 95 (7): 3402–3407 [2019-02-11]. ISSN 0027-8424. PMID 9520378. doi:10.1073/pnas.95.7.3402. （原始内容存档于2019-02-12） （英语）.
- ^ Mildvan, A. S.; Loeb, L. A.; Ferrin, L. J.; Serpersu, E. H.; Mullen, G. P. Metal binding to DNA polymerase I, its large fragment, and two 3',5'-exonuclease mutants of the large fragment.. Journal of Biological Chemistry. 1990-08-25, 265 (24): 14327–14334. ISSN 0021-9258. PMID 2201684 （英语）.