克列諾片段
克列諾片段（Klenow fragment）或稱克列諾酶（Klenow enzyme），是漢斯·克列諾1970年用枯草桿菌蛋白酶（subtilisin）處理大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ時，得到的兩個片段中分子量較大的一個，它含有605個氨基酸殘基（324～928），並有大小兩個結構域，其中大結構域（518～928）具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切酶活性，小結構域（324～517）則具有5'→3'外切酶活性。[1]
exo-Klenow片段
[編輯]在一些應用中，Klenow片段的3'→5' 核酸外切酶活性可能會干擾合成進行。於是可透過修改大腸桿菌Pol A基因(D355A，E357A)使其N端324個鹼基移除並失去3'→5' 核酸外切酶活性而保留5'→3'聚合酶活性，這種形式的酶稱為exo-Klenow片段[2]。 exo-Klenow片段用於微陣列的一些螢光標記反應，也可用於序列末端加上dA和dT，這是將DNA銜接子(Adapter)連接到DNA片段的過程中的重要步驟，經常用於製備用於次世代定序(NGS)的DNA文庫。
參考資料
[編輯]- ^ Joyce, Catherine M.; Grindley, Nigel D. F.; Ng, Kimmie; Astatke, Mekbib. A single side chain prevents Escherichia coli DNA polymerase I (Klenow fragment) from incorporating ribonucleotides. Proceedings of the National Academy of Sciences. 1998-03-31, 95 (7): 3402–3407 [2019-02-11]. ISSN 0027-8424. PMID 9520378. doi:10.1073/pnas.95.7.3402. （原始內容存檔於2019-02-12） （英語）.
- ^ Mildvan, A. S.; Loeb, L. A.; Ferrin, L. J.; Serpersu, E. H.; Mullen, G. P. Metal binding to DNA polymerase I, its large fragment, and two 3',5'-exonuclease mutants of the large fragment.. Journal of Biological Chemistry. 1990-08-25, 265 (24): 14327–14334. ISSN 0021-9258. PMID 2201684 （英語）.